点突变小(大)鼠

 在目的基因上引入点突变，对于疾病模型的建立具有重大的意义，如候选点突变是基因疾病相关的人类基因SNP，对目标基因的候选位点进行点突变，若动物模型上再现了该疾病的性状，则建立的小鼠模型可以为精准治疗提供模拟人类疾病的动物模型。

技术原理简介

基因点突变(Point Mutation)是指通过TALEN/CRISPR技术在靶基因的目的位置引进特定的突变。通过针对靶基因的待突变位点设计相应的打靶质粒，并且根据需要点突变的位置构建含点突变的Donor质粒，将Donor质粒与打靶质粒共同显微注射进小鼠的受精卵中，TALEN/CRISPR定位到基因组上的靶序列并切割双链DNA，在随后的修复过程中，细胞以含同源序列的Donor质粒为模版修复基因组DNA，最终获得在目的DNA序列引进点突变的小鼠。
 

 TALEN/CRISPR构建定点敲入小(大)鼠技术流程图

 

服务流程及周期

 

服务流程及周期图

步骤	内容	周期
敲入元件获得	客户提供或全基因合成	根据实际情况而定
Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)构建	合成Cas9/gRNA，检测Cas9/gRNA活性，构建同源模板质粒	2个月
得到Founder	Cas9/gRNA体外转录成mRNA和Donor质粒共同显微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宫，3周后出生，2周龄基因型鉴定。	2-3个月
得到F1代杂合子	2个月后性成熟，Founder和野生型小鼠交配，3周后出生，2周龄基因型鉴定，获得稳定传代的基因突变杂合子F1代。	3-4个月