基因敲除细胞系构建

慢病毒Cas9表达系统采用慢病毒表达Cas9或者Cas9-Nicknase蛋白，用于构建稳定表达Cas9蛋白的细胞株。Cas9蛋白的编码框长达4kb，将Cas9基因高效导入细胞是应用Cas9/CRISPR系统进行基因敲除的难点之一，Cas9基因的长度极大地限制了基因导入细胞方法的选择以及基因敲除的实验设计。通过构建稳定表达Cas9蛋白的细胞株，可以更自由地设计基因敲除体系，也可以提供更好的Cas9蛋白表达效率，从而提高基因敲除效率。