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稳转沉默细胞系构建
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。慢病毒载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如神经细胞、肝细胞、心肌细胞、内皮细胞、干细胞、原代细胞以及悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。
载体示意图
注:5′LTR、3′LTR 、RRE均为慢病毒的元件;U6、CMV为启动子;2A为自剪切多肽,蛋白的高效表达,表达后自动剪切。EGFP为增强绿色荧光蛋白;Mcherry为红色荧光蛋白;Puro为嘌呤霉素;Nanoluc-EGFP为荧光素酶和绿色荧光蛋白融合蛋白。
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